蛋白质定量分析No.1

蛋白质定量分析是生物化学等生命科学中最常涉及的分析内容。是临床疾病诊断和康复检查的重要指标，也是许多生物制品、药品和食品质量检验的重要指标。在生化实验中，对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析是一项非常重要的任务。

蛋白质种类繁多，结构不均一，分子量差异较大，这给建立理想的、通用的蛋白质定量分析方法带来了许多具体的困难。目前测定蛋白质含量的方法有多种，根据测定方法不同可分为以下几种。

物理：紫外分光光度法

化学：凯氏定氮法、福林酚试剂法（Lowry法）、BCA法。

染色或荧光：考马斯亮蓝法（布拉德福德法）、银染法和荧光染料。

No.2 四种常用方法

测量蛋白质浓度的方法有很多种，但每种方法都有其自身的特点和局限性。需要在了解各种方法的基础上，根据不同的情况选择合适的方法，以满足不同的要求。例如凯氏定氮法最为准确，但操作复杂，不适合大批量样品的检测。 Lowry法精度高，但耗时长，对每一步的时间要求比较严格。 Bradford法灵敏、简单，但易受洗涤剂影响。 BCA法因其试剂稳定、抗干扰能力强、结果稳定、灵敏度高而受到青睐。

在蛋白质浓度的测定中，以下四种方法最为常见：

下面主要介绍常用的Lowry法、Bradford法、BCA法、紫外分光光度法：

1: 洛瑞法

其原理是蛋白质中含有酚络合物，能与酚试剂中的磷钼钨酸反应生成蓝色化合物。其最大吸收波长为750nm，蛋白质含量与750nm处的吸光度成正比。

该方法的特点是灵敏度高，最大显色时间约为15分钟，稳定性至少几个小时。缺点是实验过程中需要精确控制试剂的添加时间，干扰因素较多（如上表所示）。

2.BCA方法

在碱性条件下，Cu2+被蛋白质还原为Cu+，与BCA试剂形成蓝紫色络合物，最大吸收峰在562nm处。在一定范围内，蛋白质含量与562nm处的吸光度成正比。

该方法灵敏度高，操作简单，试剂及其显色络合物稳定，受干扰物质影响较小。其优点是不受去垢剂影响，与样品中的5% SDS、5% TritonX-100和5% Tween 20、60和80兼容。然而，它会受到螯合剂和稍高浓度的还原剂的影响。

:布拉德福德方法

考马斯亮蓝G250在游离状态下呈红色，其最大吸光度值为488nm。当它与蛋白质结合时，它变成青色，蛋白质-色素组合在595nm处有最大的光吸收。在一定范围内，吸光值与蛋白质含量成正比。

Bradford 法灵敏度高，可以检测微量蛋白质。该方法简单、快速、重现性好。但常用试剂会对结果产生不同程度的干扰。三羟甲基氨基甲烷、巯基乙醇、蔗糖、甘油、EDTA和少量洗涤剂影响不大。而1% SDS、1% TritonX-100和1% Hemosol干扰严重。而且显色结果受时间和温度影响较大，因此需要保证样品和标准测量控制在相同的条件下。

四位：分光光度计法

受蛋白质残留影响，蛋白质溶液在280nm附近有较强吸收。如果蛋白质溶液中存在混合核酸，会对测量结果产生很大影响。核酸的最大吸收峰在260nm处。因此，可以同时测量280nm和260nm处的吸光度，并可以计算出正确的蛋白质含量。

该方法不需要任何试剂，操作简单，样品可回收。但也需要注意的是，使用公式时，各种蛋白质和核酸在280nm和260nm处的吸收值并不相同，因此计算结果不正确。

摘要3

综上所述，这些方法都可以用于蛋白质的定量分析，但每种方法都有不同的优缺点，因此应根据实际实验条件选择最合适的方法。

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